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Yu J et al. Circular RNA cSMARCA5 inhibits growth and metastasis in hepatocellular carcinoma. J Hepatol. 2018 Jun;68(6):1214-1227.

这是Yu J等人于2018年6月在《J Hepatol》上发表的一篇文章。文章证明了环状RNA- cSMARCA5可作为miR-17-3p/miR-181b-5的海绵分子，吸附miR-17-3p/miR-181b-5，从而消除癌症抑制因子TIMP3的抑制作用。而在HCC中，DHX9的表达水平上调，抑制cSMARCA的表达，导致cSMARCA表达量下降，最终促进HCC的生长和转移。

2、主要内容

1.对5例人HCC组织（癌T、癌旁N）的RNA-seq和热图筛选出差异表达的10种circRNA，并用qPCR验证其在HCC中的表达。通过RNase R处理验证其环状特性，通过qPCR扩大样本验证（40例）；

2.cSMARCA5在肝组织中含量丰富，且在HCC中明显下调。通过oligo(dT)引物、RNase R消化或半衰期比较，证实了cSMARCA5的环状特性及高稳定性；

3.研究发现SMARCA5的14号内含子和16号内含子有高度反向互补序列，为验证该两端序列（I14RC和I16RC）是否促进cSMARCA5生成，构建cSMARCA5野生型载体和两端片段截断载体，结果显示仅野生型载体高表达cSMARCA5；

进一步的DHX9敲除、RIP显示，由于DHX9的调控，cSMARCA5在HCC中低表达；

4.通过qPCR定量163例人HCC组织（T、N）中cSMARCA5水平，其K-M生存曲线显示，cSMARCA5水平较低的HCC患者总生存率（OS）和无复发生存率（RFS）较差；多变量分析显示，cSMARCA5表达水平是OS、RFS的独立危险因素；

5.在HCC细胞中过表达cSMARCA5，CCK8、划痕实验和Transwell表明过表达cSMARCA5抑制HCC细胞的生长及迁移；裸鼠皮下注射、原位植入和尾静脉注射显示，过表达cSMARCA5抑制HCC生长和转移；

6.miRanda软件预测筛出29个可能在HCC中与cSMARCA5互作的miRNA，结合circRNA免疫沉淀，发现miR-17-3p和miR-181b-5p在沉淀中富集；荧光素酶测定、pull-down实验证明了cSMARCA5与miR-17-3p、miR-181b-5p的互作，FISH显示其共定位与细胞质；

7.过表达cSMARCA5可显著上调miR-17-3p、miR-181b-5p的共同靶标TIMP3，一种肿瘤抑制因子；体外功能实验显示，过表达miR-17-3p、miR-181b-5p时TIMP3水平降低，促进HCC的生长、迁移，而cSMARCA5的过表达能恢复TIMP3的水平，打破这种促进作用。

3、启发思考

近年来，环状RNA（circRNAs）被发现在肿瘤生物学中发挥着重要的调控作用。然而，环状RNA在肝癌（HCC）中发挥的作用在很大程度上依然未知。文章展示了circRNA的经典研究套路：首先通过测序寻找癌组织与癌旁组织差异表达的circRNA，并预测其靶基因，然后用免疫沉淀验证circRNA和靶miRNA的互作，最后再找到miRNA调控的靶基因，进而揭示出circRNA-miRNA-mRNA调控途径。