转自： 榕城妇瘤（微信公众号）

尽管过去几十年以来宫颈癌的防治取得了重大进展，但是人们对宫颈癌发生机制仍然知之甚少。非编码RNA——circRNA首先在20世纪90年代初被发现，研究发现它们许多疾病包括癌症的发生发展中具有重要作用。例如在结肠直肠癌中的CircRNA_0000069和肝癌中的CircRNA_0001649表达差异，提示CircRNA可以作为生物标志物。那么circRNA在宫颈癌中又扮演了什么样的角色？

最近发表在《JOURNAL OF CELLULAR PHYSIOLOGY》（影响因子：3.923，中科院分区：2区）的一篇题为《CircRNA hsa_circRNA_101996 increases cervical cancer proliferation and invasion through activating TPX2 expression by restraining miR‐8075》中，为我们揭示了CircRNA_101996在宫颈癌进展中的作用及其机制。

为了探索CircRNA在宫颈癌中的功能，分析了GSE102686中差异表达最多的CircRNA- circRNA_101996(图1a)；接着研究人员收集并采用逆转录定量 PCR（qRT-PCR）测量39对宫颈癌及癌旁组织中circRNA_101996的相对表达水平，紧接着作者分析了circRNA_101996表达与临床病理学因素之间的关系。

图1 CircRNA_101996在宫颈癌组织中上调

结果显示circRNA_101996在宫颈癌组织中的表达与癌旁组织高得多，并且表达量随着宫颈癌分期增加而增加。同时，与无转移组织相比，转移癌组织中circRNA_101996表达更高。与此一致，高表达circRNA_101996的宫颈癌肿瘤体积大，二者存在相关性。更重要的是，高表达circRNA_101996的患者术后存活率较低。总之，这些结果表明circRNA_101996表达与宫颈癌进展相关（图2）。

图2 CircRNA_101996与宫颈癌进展相关

为了进一步深入探讨circRNA_101966如何促进宫颈癌的进展，研究者进行了功能学研究以明确circRNA_101996表达与宫颈癌进展之间的关系。CCK的增殖测定证明circRNA_101996敲减后宫颈癌SiHa和CaSki细胞增殖显著受到抑制（图3a，b）。细胞分布分析显示circRNA_101996敲减后导致更多的细胞停滞在G0 / G1期，而进入在S期和G2 / M期细胞更少（图3d）。此外， circRNA_101996敲减显著了抑制SiHa和CaSki细胞的迁移和侵袭能力（图3e，f）。

图3 CircRNA_101996敲减抑制细胞增殖、迁移和侵袭

circRNA_101996作用的具体靶基因在哪呢？为了弄清上述问题，作者通过生物信息学分析预测circRNA_101996可能存在miR-8075的结合位点。通过设计circRNA_101996中的结合序列“CAUCAGCA”突变为“CUAGUCGA”以产生Mut-hsa_circRNA_101996。为了揭示宫颈癌中可能的circRNA-iRNA-RNA环，研究者，我们发现miR-8075可能与TPX2的3' UTR区域结合（图4a）。荧光素酶测定证实了miR-8075与TPX2的结合活性，并且该结合抑制了TPX2荧光素酶活性（图4b）。更重要的是，SiHa和CaSki细胞中miR-8075的过表达显著抑制TPX2表达（图4c）。

图4 CircRNA_101996通过miR-8075促进TPX2表达

为明确circRNA_101996是否通过TPX2促进宫颈癌的进展，研究者在circRNA_101996沉默的宫颈癌细胞中恢复了TPX2表达（图5a）并进行了功能测定。增殖测定显示TPX2回复了circRNA_101996敲减对SiHa和CaSki细胞增殖的抑制作用。同时， TPX2回复后，细胞的迁移和侵袭能力也一定程度恢复，进一步提示circRNA_101996可能通过TPX2促进宫颈癌进展。

图5 TPX2过表达回复了宫颈癌细胞中circRNA_101996敲减的影响

在动物实验中，研究者构建裸鼠circRNA_101996敲减移植瘤模型，每5天测量肿瘤大小一次，结果显示circRNA_101996敲减引起裸鼠移植瘤肿瘤大小减少和重量降低（图6）。

图6 敲减circRNA_101996后抑制裸鼠移植瘤模型肿瘤的增殖

根据前人的数据，CircRNA，miRNA和mRNA在基因调控中形成CircRNA-miRNA-mRNA网络。本研究揭示CircRNA_101996与miR-8075结合，并抑制miR-8075的功能。同时，miR-8075的下调促进宫颈癌的进展，因此，miR-8075在宫颈癌中起到肿瘤抑制剂的作用，这与circRNA_101996相反。 miR-8075通过TPX2在宫颈癌中起作用。验证了circRNA_101996介导的miR-8075抑制对TPX2的上调促进了宫颈癌的增殖，迁移和侵袭。总之，研究结果揭示了circRNA_101996-miR-8075-TPX2网络促进宫颈癌进展的新机制。

参考文献

Song T, et al. CircRNA hsa_circRNA_101996 increases cervical cancer proliferation and invasion through activating TPX2 expression by restraining miR-8075, J Cell Physiol, 2019, 234(8): 14296-14305.