原创： 张雅文 Htology

急性髓细胞性白血病（AML）是儿童和成人中最常见的血液肿瘤类型之一FOXO3基因通常被认为是一种抑癌基因。Circ-Foxo3是将3’末端连接到5’末端的圆形非编码RNA。学者发现circ-Foxo3可以与Foxo3竞争与某些miRNA的结合。在这项研究中，研究人员检测了新发急性髓细胞性白血病（AML）患者中Foxo3和circ-Foxo3的表达，以探索Foxo3基因与circ-Foxo3之间的关系，并对预后进行生存分析。该研究发表在国际知名杂志《BMC cancer》上。

研究方法

实验组的骨髓（BM）样本为新发AML，而对照组则来自健康的BM供体或患有胸部创伤的患者。通过实时定量PCR在122例新发AML患者和30例对照样本中检测了Foxo3基因。在116例从头AML患者和24例对照样本中进行检测circ-Foxo3基因。用受试者工作特征曲线以区分AML患者和对照组。通过KM存分析进行Foxo3表达与总生存的关联。

研究结果

表1:AML风险分层定义

在这项研究中，作者检测Foxo3和circ-Foxo3在对照组和新发AML患者中的表达水平。新发 AML患者中Foxo3表达水平（1.0×106-456.234，中位数1.193）明显低于对照组（0.001–49.528，中位数5.619）（P=0.009）。同时，新发AML组CIRC-FOXO3表达水平（2.8×105-5.761，中位数0.1198）也低于对照组（1.2×105-3.210，中位数0.5017）（P =0.04）

图1: 通过使用RQ-PCR在健康对照和整个AML样本中测量BMNC中Foxo3和circ- Foxo3的表达。水平线表示中位数，每个点代表单个样本。

通过ROC曲线分析Foxo3和circ-Foxo3表达的诊断价值。AML可以明确的和对照组区分，AUC为0.655（95％CI：0.556-0.753; P = 0.009）。根据ROC曲线分析的结果，确定Foxo3表达的阈值为0.856，敏感性和特异性分别为44.7％和87.7％。类似地，CIRC-FOXO3可以区分AML患者与对照组，AUC为0.633（95％CI：0.523-0.746; P = 0.041），circ-Foxo3的阈值为0.233，敏感性和特异性分别为62.1％和75％。同时研究发现，Foxo3和circ-Foxo3表达呈现正相关。

图2：Foxo3和circ-Foxo3的表达为鉴定AML患者提供了诊断工具。a. AML患者中Foxo3；ROC分析显示Foxo3的曲线下面积（AUC）为0.655（P= 0.009）；b. AML患者中的circ-Foxo3，ROC分析表明Foxo3的曲线下面积（AUC）为0.633（P= 0.041）。

图3: 用Spearman相关检验进行细胞系和AML患者中Foxo3和circ-Foxo3表达的相关性分析。 a.在细胞系中，Foxo3和circ-Foxo3正相关（R = 0.986 P = 0.0021）；b.在AML患者中，Foxo3和circ-Foxo3正相关（R = 0.63 P <0.001）

根据Foxo3表达的临界值0.856 ，将AML患者分为两组，即Foxo3高表达组和低表达组，分析发现：性别，年龄，白细胞（WBC），血红蛋白（HB），血小板（PLT），肿瘤原始细胞百分比，核型分类，WHO分类和其他七个基因突变方面均无统计学差异。

表2: AML患者与Foxo3表达的临床表现比较

作者对Foxo3高表达组和Foxo3低表达组患者进行了Kaplan-Meier生存曲线分析。研究发现，有趋势表明 Foxo3高表达组患者的生存时间（95％CI，15.75–29.42个月，中位值，10个月）比Foxo3低表达组患者长（95％CI，10.54–22.46个月，中位值， 7个月）（P = 0.192）。在非M3患者中，Foxo3高表达组患者的总生存（OS）时间（95％CI，12.90–26.74个月，中位值，9个月）比Foxo3低表达组患者OS长（95％CI，5.09–12.08个月，中位值，4个月）（P = 0.002）。在正常核型患者，Foxo3高表达组患者的总体生存时间（95％CI，12.23-36.33月，中位值，7个月）显著长于Foxo3低表达组患者（95％CI，5.31-16.24月，中位值（6个月）（P = 0.034）。在中等和高风险组中，Foxo3低表达组患者的生存时间（95％CI，4.22–10.69个月，中位数，3.5个月）比Foxo3高表达组患者短（95％CI，10.91–25.13个月，中位数，6个月）（P = 0.004）。此外，在非M3，低风险和正常核型组中，具有高Foxo3表达水平的患者的无白血病生存时间（LFS）要比低水平患者更长。作者还对AML患者的这两个基因之间进行了Pearson分析。结果显示它们呈正相关（R = 0.63，P <0.001）。

图4: Foxo3表达对AML患者总生存的影响

图5: FOXO3表达对AML患者总生存的影响。a.正常的核型患者；b.中高风险患者；c.非M3患者。

图6: FOXO3表达对AML患者无病生存时间的影响。a.正常的核型患者；b.中高风险患者；c.非M3患者。

文章还进行了单变量和多变量分析（COX回归模型），应用年龄（≤60岁vs.> 60岁）性别（男性对比女性），WBC（≥30×109/L与<30×109/L），HB（<110 g/L vs ≥110g/L），PLT（100×109/L vs.100 ×109/L），核型分类（有利，中等，较差），基因突变（突变型与野生型）和Foxo3表达状态（高与低）作为协变量。单因素分析表明，NPM1，年龄，核型分类和WBC计数是AML患者的独立危险因素。经过多因素分析，发现核型分类Foxo3表达和年龄是影响AML预后的因素。其中，Foxo3表达是一个保护因子。此外，核型分类和年龄也是不良预后因素。FOXO3和CIRC-FOXO3的表达对AML患者65岁以下和中间组的总体生存时间无影响。

表3 AML患者总生存率的单因素和多因素分析

图7: FOXO3和CIRC-FOXO3的表达对AML患者65岁以下和中间组的总体生存时间的影响。a. Foxo3; b. circ-Foxo3

研究结论

综上，研究发现在AML患者中circ-Foxo3和Foxo3的低表达是常见的，而Foxo3的高表达的患者往往有更好的预后趋势。

参考文献：Zhou J et al .BMC Cancer. 2019 Sep 18;19(1):930. doi: 10.1186/s12885-019-5967-8.