原创：王聪 吉满生物

膀胱尿路上皮癌（UCB）是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤，复发率和死亡率都很高。2015年中国癌症统计数据估计，在中国，UCB每年导致约80500例新病例和32900例死亡，并且发病率和死亡率稳步上升。

尽管外科手术和化疗等方法正在不断改进，但是仍需要鉴定UCB的新的生物标志物和治疗靶标，这对于UCB的诊断和治疗非常重要。

circRNA是一类新型非编码RNA，其特征是在3’和5’末端形成共价闭环结构，早在1970年代就在真核细胞发现了circRNA的存在，当然是被错误地认为是前体mRNA错误剪接的垃圾产物。

随着高通量测序和生物信息学分析的发展，目前已从哺乳动物细胞中鉴定出30000多个circRNA，与线性RNA相比，它们具有明显的稳定性，高丰度和保守性。

这些显著特征表明，circRNA并不是无功能的小分子，很可能在基因表达中具有潜在的调控作用。目前已经确定其中一种作用是作为miRNA的竞争内源性RNA（ceRNA）。

miRNA是一类短的非编码RNA，长度约为23个核苷酸，可通过直接降解mRNA或抑制mRNA的翻译来调控基因表达。

近年来，许多研究表明，miRNA与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。而circRNA可以通过作为miRNA的海绵来调节许多恶性肿瘤的发生、发展和转移。但是，circRNA在膀胱尿路上皮癌（UCB）中的机制仍不清楚。

近日，南京鼓楼医院泌尿外科郭宏骞、杨荣及南京医科大学方丰作为共同通讯作者，在 Cell Death＆Disease 杂志发表题为：Circular RNA FAM114A2 suppresses progression of bladder cancer via regulating ∆NP63 by sponging miR-762 的研究论文。

该研究发现并命名了一种新型circRNA——circFAM114A2，进一步证实，该circRNA通过作为miR-762的海绵来调控∆NP63，从而抑制膀胱癌进展。

发现circFAM114A2

首先，研究团队通过RNA-seq数据分析发现，circFAM114A2在UCB组织标本和细胞系中的表达水平均显著下调，并且其表达水平与病理TNM分期和等级高度相关。

该circRNA由FAM114A2基因的2-4号外显子剪接而来，因此命名为circFAM114A2，该circRNA长度为417nt，荧光原位杂交（FISH）实验表明，该circRNA定位在细胞质中。

circFAM114A2抑制UCB

体外功能试验表明，过表达circFAM114A2能显著抑制UCB细胞的迁移、侵袭和增殖。

circFAM114A2作为miR-762的海绵

circRNA的一个重要作用是作为miRNA的海绵来调控基因表达。为了探索circFAM114A2在UCB细胞中的miRNA海绵能力，通过生物信息分析数据库（RNAhybrid和miRanda）预测到了35个miRNA。

其中4个miRNA是潜在致癌基因。其中miR-629-3p和miR-762在UCB细胞中高表达。通过生物素标记的circFAM114A2特异性探针实验发现，miR-762是唯一与circFAM114A2结合的。FISH实验表明，circFAM114A2和miR-762共定位在细胞质中。

这些结果表明，circFAM114A2可以直接靶向miR-762，并充当UCB细胞中miR-762的海绵。

miRNA促进UCB

之前的研究表明，MiR-762在乳腺癌和卵巢癌中起到癌基因的作用。此次研究发现，miR-762在UCB细胞系和患者组织样本中高表达。

功能试验表明，过表达miR-762后，UCB细胞的迁移、侵袭和增殖能力显著增强，而敲低miR-762后，UCB细胞的迁移、侵袭和增殖能力减弱。

这些结果表明，miR-762是UCB中的致癌基因，可通过促进细胞迁移、侵袭和增殖来促进UCB的进展。

MiR-762通过靶向ΔNP63促进UCB进展

circRNA通常通过circRNA–miRNA–mRNA信号通路参与肿瘤的进展，数据库预测表明，ΔNP63是miR-762的直接靶标基因。ΔNP63是UCB中TP63的主要亚型。

双荧光素酶报告基因实验证实，miR-762可以直接靶向ΔNP63的3’UTR区。

接下来，过表达miR-762后，ΔNP63表达显著下降，而敲低miR-762后，ΔNP63表达显著上升。这些实验结果说明，ΔNP63是miR-762的下游直接靶标（之一）。

体内动物实验

为了进一步研究circFAM114A2在体内的作用，分别将过表达circFAM114A2的T24细胞和对照细胞皮下注射到裸鼠腋窝中。

试验结果表明，过表达circFAM114A2组小鼠的肿瘤明显更小，且它们的ΔNP63蛋白表达液更高，这些结果表明，circFAM114A2的过表达可以通过调控ΔNP63在体内抑制癌细胞生长。

综上所述，这项研究发现并证实了，circFAM114A2通过作为miR-762的海绵，从而降低了miR-762表达水平，进而增加ΔNP63表达，最终实现对膀胱癌的抑制作用。

这些结果表明，circFAM114A2可能作为有希望的潜在生物标志物和UCB的新型治疗靶标

原文：https://mp.weixin.qq.com/s/WSTB8_SVt9kb-cvLihxGUg