原创 小拜 英拜生物

环状RNA（circRNA）是一类非编码RNA，可以参与各类生理和病理过程，包括肿瘤发生和癌症进展等，备受科学界的关注。对于circRNA的研究正在火热进行中，那么关于它的研究思路知多少呢？一篇发表在Molecular Cancer上面的文章带我们了解这个明星分子。

研究思路：

结果：

1、非小细胞肺癌（NSCLC）细胞中成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）衍生的circRNA的鉴定
circFGFR1（hsa_circ_0084003）在NSCLC肿瘤组织的表达上调，circFGFR1高的NSCLC患者有较大的肿瘤、淋巴结转移和细胞分化不良，circFGFR1高表达的患者预后明显比低表达的差，circFGFR1表达是术后复发和总生存期的独立预测因子。这些表明circFGFR1可能参与了非小细胞肺癌的进展。

2、 体内外CircFGFR1促进NSCLC细胞增殖，迁移和侵袭 NCI-H358和NCI-H1299细胞过表达circFGFR1，促进了增殖，迁移和侵袭。癌细胞皮下植入裸鼠，发现circFGFR1过表达显著促进肿瘤生长和肺转移。

3、CircFGFR1充当多种miRNA的海绵

使用RIP circFGFR1下拉实验，纯化circFGFR1相关的RNA，发现circFGFR1和miR-381-3p的富集，表明miR-381-3p是NSCLC细胞中与circFGFR1相关联的关键miRNA之一；RNA免疫沉淀结果显示circFGFR1和miR-381-3p显著富集；萤光素酶实验显示miR-381-3p降低了野生型circFGFR1细胞荧光素酶活性；使用生物素化的miR-381-3p模拟物下拉分析发现circFGFR1显著富集；FISH分析表明circFGFR1和miR-381-3p共定位在NSCLC细胞中；circFGFR1过表达或沉默不影响miR-381-3p表达，miR-381-3p上调或敲低后circFGFR1没有显著变化。这些表明circFGFR1和miR-381-3p可能不会降解彼此。以上所有实验表明NSCLC细胞中circFGFR1可能充当miR-381-3p的海绵。

4、 CircFGFR1海绵miR-381-3p上调CXCR4表达

StarBase v3.0，PITA和miRanda算法被用来预测miR-381-3p靶基因，几种致癌基因UBE2C，FGF7，FGFR2，FGFR1，IGF2BP1，MET和CXCR4 3’UTR mRNA包含miR-381-3p的靶序列。pLG3荧光素酶报告基因显示转染了野生型（wt）3’UTR序列的细胞的荧光活性能被miR-381-3p模拟物抑制；CXCR4 mRNA和蛋白的水平在miR-381-3p过表达细胞中降低，CXCR4 mRNA和蛋白的水平在circFGFR1过表达后明显增加；在NSCLC患者组织样本中发现circFGFR1和CXCR4正相关。

5、敲除CXCR4可逆转circFGFR1诱导的非小细胞肺癌细胞的增殖，迁移和侵袭CXCR4-基因敲除NCI-H358和NCI-H1299细胞过表达circFGFR1 恶性表型与对照细胞无明显差异。

6、较高水平的circFGFR1表达与细胞毒性T淋巴细胞排斥和抗PD-1 NSCLC治疗相关

调查circFGFR1 / CXCR4轴和免疫逃逸之间的关系，NSCLC组织中CD8 + T数明显低于邻近的非肿瘤组织，NSCLC组织circFGFR1 /CXCR4表达和CD8 + T细胞之间存在负相关，miR-381-3p表达与CD8 + T显示出正相关，这些提示circFGFR1可能通过海绵miR-381-3p上调CXCR4发挥其免疫抑制作用。进而评估circFGFR1表达对抗PD-1治疗抵抗力的作用，分析PD-1抗体在接受LLC-circFGFR1细胞异种移植小鼠中的抗肿瘤作用，发现LLC-circFGFR1组肿瘤生长表现出明显的对PD-1抗药性表型，生存时间较短。